Northern blot


Northern blot je laboratorní postup sloužící k nalezení, měření délky a množství RNA transkriptů zájmového genu ve směsi různých RNA molekul.[1][2] Využívá se ke zjišťování míry exprese jednotlivých genů u organismů, jejich tkání či samotných buněk. To umožňuje například identifikaci genů zodpovědných za některá onemocnění či detailní výzkum průběhu embryonálního vývoje živočichů.[3] Jméno získal díky své podobnosti s technikou Southern blot (pojmenovaná podle jejího vynálezce profesora Edwina Southerna).[1]

Postup


Nejprve se vzorek RNA denaturuje a rozdělí podle délky za pomocí nanesení na agarózový gel, kde proběhne tzv. gelová elektroforéza. Poté je přenesen na nylonovou membránu a na ní zafixován. (Podle tohoto kroku je technika pojmenovaná blot nebo blotting. Jde o anglický termín užívaný pro vysoušení povrchu za pomoci absorbčního materiálu.) Za využití označené próby se dále provádí hybridizace s RNA, tzn. nanesení komplementární DNA nebo RNA k hledané sekvenci. Na pevné membráně tak dojde k vazbě hledaných kusů RNA s komplementární próbou, která je poté obvykle dobře detekovatelná díky svému označení radioaktivními atomy nebo fluorescenčním barvivem. Pak je již možné vyhodnotit přítomnost hledaných segmentů RNA.[2][4]

Později byla objevena i technika takzvaného reverzního nothern blotu, který umožňuje za pomoci RNA próby označit hledané segmenty DNA.[1]

Reference


  1. a b c KLIONSKY, Daniel J. Blame it on Southern, but it's a western blot. Autophagy. 2016-11-28, roč. 13, čís. 1, s. 1–2. PMID: 27893304 PMCID: PMC5240824. Dostupné online [cit. 2018-09-10]. ISSN 1554-8627 . DOI:10.1080/15548627.2016.1255382 . PMID 27893304 .
  2. a b Northern blot | Learn Science at Scitable. www.nature.com [online]. [cit. 2018-09-10]. Dostupné online . (anglicky)
  3. Southern, Northern, Western, and Eastern blots. AAAS - The World's Largest General Scientific Society. 2016-06-10. Dostupné online [cit. 2018-09-10]. (anglicky)
  4. HE, Shan L. Northern blot. Methods in enzymology. 2013, roč. 530, s. 75–87. PMID: 24034315 PMCID: PMC4287216. Dostupné online [cit. 2018-09-10]. ISSN 0076-6879 . DOI:10.1016/B978-0-12-420037-1.00003-8 . PMID 24034315 .









Kategorie: Biochemické metody | DNA | RNA




Poslední aktualizace: 20.02.2021 03:36:52 CET

Zdroj: Wikipedia (autoři [Dějiny])    licence: CC-by-sa-3.0

Změny: Všechny obrázky a většina návrhových prvků, které s nimi souvisejí, byly odstraněny. Některé ikony byly nahrazeny FontAwesome-Icons. Některé šablony byly odstraněny (např. „Článek potřebuje rozšíření“) nebo byly přiřazeny (např. „Poznámky“). Třídy CSS byly buď odstraněny, nebo harmonizovány Byly odstraněny konkrétní odkazy na Wikipedii, které nevedou k článku nebo kategorii (jako „Redlinks“, „links to edit page“, „links to portals“). Každý externí odkaz má další obrázek. Kromě několika drobných změn designu byly odstraněny mediální kontejnery, mapy, navigační krabice, mluvené verze a geomikroformáty.

Upozornění Protože daný obsah je v daném okamžiku automaticky převzat z Wikipedie, ruční ověření bylo a není možné. LinkFang.org proto nezaručuje přesnost a aktuálnost získaného obsahu. Pokud existují informace, které jsou v tuto chvíli chybné nebo mají nepřesné zobrazení, neváhejte a kontaktujte nás: e-mail.
Viz také: Tiráž & Ochrana dat.